吉人天相粤语版】【钟尔璞简历】【兰陵相思赋txt】【我是马尔福夫人】【pps神仙道】【白静凶案内幕】【异界之算命大师】【恩施大峡谷走钢丝】【光荣使命之特战精英】【爱在春天 张恺彤】【ca1058航班】【红色hero】【鸟叔出车祸】【小薇手语舞】【阿桑奇接受问讯】【全民最大党20091001】【lc王道】【小河北最新】【黄义达壁纸】【qq摩天大楼小秘】【透支爱情贴吧】【成都上演人虫大战】【一家之鼠3】【happy together 宋智孝

体彩app

预订电话:13356666691

联系我们Contact Us

更多>>

手机1:1335 66666 91(总监 李峥)
手机2:158 666 89081
邮箱:weiyaem@126.com
网址:weiya-em.com
公众号:生物医学电镜
第一实验室:济南段兴西路4号 贝博体彩app省立医院西院4号楼103室 

第二实验室:济南经四路544号 贝博体彩app省立医院科教园1号楼306/305
单位:贝博体彩app微亚生物科技有限公司
邮编:250022
乘车:27路、42路直达

所在位置:首页 > 送样须知

TEM离体细胞的取材与固定

更新时间:2017-04-23 点击数:3209

贝博体彩app

离体细胞包括培养细胞、脱落细胞、细菌、精子、卵子和 血液细胞等散在不同介质中,取材关键是:使细胞完好无损的从介质中分离出来,并形成细胞团块。如果富集的细胞团块较大,必须分割成约1.5 mm3的小块。离体细胞取材与固定方法主要有:离心沉淀法、原位固定法等,视不同研究目的而定。取材前,应根据不同种类培养细胞及其研究目的,选择合适的取材时间点,确保使培养细胞存活状态符合研究目的,要求细胞数量106,同时应检测调整缓冲液与24% 固定液的pH细胞培养液的pH相同,并且温度接近刚从4 ℃冰箱取出的缓冲液和固定液不能直接注入培养细胞。

A.悬浮培养细胞取材与固定 

(1)全细胞悬液置入洁净离心管;

(2)1 000 r/min低速离心5 min,使离心管底部形成细胞团;

(3)弃去上清液,加入缓冲液,选择合适的离心速率和时间,如采用5 000 r/min,离心10 min,至出现致密贴壁的细胞团块、用牙签挑起不散;

(4)弃去上清液,注入2%4%戊二醛(或多聚甲醛和戊二 醛混合固定液),即可送专业实验室进入后续制备。

注意:当用牙签挑起细胞团块时,若细胞呈分散状,最好在离心管中注入5 L左右血清或抗凝血浆蛋清亦可,充分混合后再次离心,直至管底部出现致密贴壁细胞团块。为提高细胞固定效果,也可以先在细胞培养液中加入等量2%4%戊二醛固定液或混合固定液,固定 1 min之后离心成团。

B.贴壁培养细胞取材与固定 

依据研究目的和要求不同,贴壁培养细取材有3种方法。 一是“先离心后固定”,即:弃去培养液,加入等温的缓冲液用细胞划片刮取细胞,作细胞悬液,参照上述悬浮细胞取材步骤操作。二是“先固定、后离心”,即:弃去一半或分部培养液,快速加入适量等温的醛类固定液,固定1min左右,刮起细胞细胞悬液。三是“原位固定、倒扣包埋”。

注意:每种细胞(包括细菌)大小不同,其最佳离心富集速率和时间不同,一般参考值为:5 000 r/min5 ~10min。太高离心转速和离心时间会造成细胞挤压、变形等;而太低的转速往往不能一次离心成团,长时间反复离心同样伤细胞。应充分检索文献并确认取材细胞适宜的富集速率时间再着手实验,避免损伤细胞。

C.极少的离体细胞取材与固定

对于极少的离体细胞<104如脱落细胞等,收集细胞有一定难度,可采用尖底离心管或自制模具,注入血清或抗凝血浆,与细胞充分混合后离心。

D.卵母细胞和受精卵细胞的取材与固定

虽然卵母细胞和受精卵细胞体积很大,但每枚卵细胞在缓冲液中都是透明的,且数量少,肉眼难以观察。为形成可视的细胞团块,取材时可选择其他培养细胞,如颗粒细胞等与卵细胞混合离心,卵细胞包被在非卵细胞之中,再按上述方法处理。

E.血细胞的取材与固定

首先要解决血液凝固问题,加入肝素、柠檬酸钠或EDTA等抗凝剂,阻止血小板与纤维蛋白结合,例如 采用3.8%柠檬酸钠,当抗凝剂与血液的比例为1 9时,血液不会凝固。然后,抗凝全血以1 000 r/min15 min离心,离心管抗凝血液便析出三层细胞,底部红色的红细胞,中间层白色的白细胞和血小板,最上层透明的是血浆,用毛细吸管缓慢吸取上清液,再用毛细吸管缓慢吸取所需要的细胞,按上述方法离心沉淀形成紧密细胞团块。

外地课题组寄送样品,请注意参考:5.寄送电镜样品注意事项

 


上一篇:TEM生物样品 组织的取材与固定

下一篇:SEM生物样品 组织的取材与固定
sitemap.xml